Де спан плюс?
Спандінг Плюс (в оригіналі "Spann Plus") – це широко використовувана система метафазного фарбування, яка дозволяє диференціювати грам-позитивні і грам-негативні бактерії на мазках-відбитках, пофарбованих за методом Романовського-Гімзи.
Цей метод заснований на здатності основного барвника – катіонної тіазинової фарби тіоніну (метиленової синьки) – зв'язуватися з кислими компонентами клітинної стінки бактерій, такими як тейхоєві кислоти в грам-позитивних бактерій і ліпополісахариди в грам-негативних бактеріях.
Механізм дії
Фіксація: На першому етапі мазок висушують і фіксують за допомогою тепла або хімічних фіксаторів, таких як метанол або етанол. Це гарантує, що бактерії залишаться на місці під час наступних етапів фарбування.
Забарвлення основним барвником: Після фіксації на мазок наносять основний барвник – тіонін. Через свою катіонну природу тіонін притягується до аніонних компонентів клітинної стінки бактерій. Він проникає всередину клітини і забарвлює цитоплазму і нуклеоїд в синій або фіолетовий колір.
Ополіскування водою: Після фарбування мазок ополіскують водою. Це допомагає видалити надлишок барвника і підготувати мазок до наступного етапу – фарбування контрастним барвником.
Забарвлення контрастним барвником: На мазок наносять контрастний барвник – фуксин. Фуксин – це кислий барвник, який притягується до основних компонентів клітинної стінки бактерій. Він забарвлює клітинну стінку грам-позитивних бактерій в темно-фіолетовий або синьо-фіолетовий колір, тоді як грам-негативні бактерії забарвлюються в рожевий або червоний колір. Це пов'язано з тим, що клітинна стінка грам-негативних бактерій містить більше ліпополісахаридів і менше тейхоєвих кислот, що робить її менш сприйнятливою до фуксину.
Ополіскування водою: Нарешті, мазок знову ополіскують водою, щоб видалити надлишок контрастного барвника.
Висушування: Висушений мазок готовий до мікроскопічного дослідження.
Відмінності між грам-позитивними і грам-негативними бактеріями
Клітинна стінка: Грам-позитивні бактерії мають товсту клітинну стінку, яка містить високий рівень тейхоєвих кислот. Грам-негативні бактерії мають тонку клітинну стінку, яка містить менше тейхоєвих кислот і більше ліпополісахаридів.
Окрашивание за Грамом: Грам-позитивні бактерії утримують комплекс тіонін-фуксин після процедури знебарвлення спиртом, тому они забарвлюются в темно-синий или фиолетовый цвет. Грам-негативні бактерії не утримують этот комплекс и обесцвечиваются спиртом, после чего окрашиваются фуксином в красный или розовый цвет.
Структура клітинної стінки: Клітинна стінка грам-позитивних бактерій складається з пептидоглікану, тейхоєвих кислот і ліпотейхоєвих кислот. Клітинна стінка грам-негативних бактерій складається з пептидоглікану, фосфоліпідів, ліпополісахаридів і білків.
Сприйнятливість до антибіотиків: Грам-позитивні бактерії більш сприйнятливі до антибіотиків, які діють на синтез пептидоглікану, таких як пеніцилін і метицилін. Грам-негативні бактерії більш сприйнятливі до антибіотиків, які діють на синтез білка, таких як аміноглікозиди і фторхінолони.
Висновок
На закінчення, поділ бактерій на групи за фарбуванням Грама вельми важливий в мікробіологічній діагностиці. Завдяки цьому методу вдається не лише позначити бактерії за їх структурою та фарбуванням, але й легко проводити подальшу диференціацію бактерій, що дає змогу визначити ступінь їх патогенності та призначити необхідне лікування для різних інфекційних захворювань.
Часті питання:
1. Що таке Спандінг Плюс?
Спандінг Плюс (в оригіналі "Spann Plus") – це широко використовувана система метафазного фарбування, яка дозволяє диференціювати грам-позитивні і грам-негативні бактерії на мазках-відбитках, пофарбованих за методом Романовського-Гімзи.
2. Як працює метод Спандінга Плюса?
Метод заснований на здатності основного барвника – тіоніну, який притягується до кислотних компонентів клітинної стінки бактерій, таких як тейхоєві кислоти в грам-позитивних бактерій і ліпополісахариди в грам-негативних бактеріях.
3. Які переваги методу Спандінга Плюса?
Метод Спандінга Плюса є простим і недорогим, він дозволяє швидко і точно диференціювати грам-позитивні і грам-негативні бактерії, що має важливе значення для діагностики і лікування бактеріальних інфекцій.
4. Які недоліки методу Спандінга Плюса?
Одним з недоліків методу Спандінга Плюса є те, що він не завжди дозволяє диференціювати деякі види грам-позитивних і грам-негативних бактерій. Крім того, метод може бути неспецифічним, що може призвести до помилкових результатів.
5. Де застосовується метод Спандінга Плюса?
Метод використовується у лабораторіях, що займаються діагностикою та контролем бактеріальних інфекцій. Зокрема, для діагностики пневмонії, менінгіту, сепсису та інших бактеріальних інфекцій.
